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附錄F,潔凈室生物學(xué)評(píng)價(jià)方法F.1,回，排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口微生物透過(guò)率F、1、1。儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求、1，儀器設(shè)備、Φ90玻璃平皿.或塑料平皿,空氣微生物采樣器 固體撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用,常用的為安德遜，Andersen,采樣器.隸屬于固體撞擊式采樣器.微生物氣溶膠發(fā)生器 由氣泵.油水分離器,流量計(jì),高效過(guò)濾器。噴霧器,緩沖瓶等組成 各種玻璃移液管.吸管，試管，容器瓶等 計(jì)時(shí)器、如秒表,恒溫培養(yǎng)箱.潔凈工作臺(tái)、高壓蒸汽消毒鍋.2.材料.胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基，生理鹽水，75.酒精，菌種。宜選用毒性小或沒(méi)有毒性 且便于區(qū)別大氣雜菌的特定菌種。常用的有枯草芽孢桿菌。黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體等、采樣介質(zhì)可選用硅酮類(lèi)，石油胨類(lèi).醇類(lèi)，糖類(lèi)。纖維素類(lèi)、蛋白類(lèi)，混合類(lèi) 組織培養(yǎng)液等，套筒.測(cè)定回,排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口時(shí)需要使用,罩住整個(gè)入口、使檢漏范圍包括邊框 長(zhǎng)度應(yīng)使通過(guò)氣流時(shí)間為0.5s，1s,見(jiàn)圖F 1 1,F。1,2,透過(guò)率應(yīng)按以下方法評(píng)價(jià).在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口進(jìn)風(fēng)端加設(shè)套筒、在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠。在過(guò)濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣,由回，排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計(jì)算得出微生物透過(guò)率，F(xiàn)。1 3,檢測(cè)步驟應(yīng)符合下列要求。1。制定方案。明確評(píng)價(jià)任務(wù)、制定詳細(xì)的評(píng)價(jià)方案 包括確定微生物氣溶膠.發(fā)生器所需的菌液濃度 潔凈壓縮空氣流量.確定在回.排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期。采樣次數(shù)等,一般可根據(jù)回，排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過(guò)濾效率進(jìn)行計(jì)算，2、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備.根據(jù)預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案 準(zhǔn)備所需材料,儀器設(shè)備。制作采樣培養(yǎng)皿,一般而言。采樣細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基，采樣病毒用根據(jù)病毒特性配制的采樣介質(zhì).3，發(fā)生微生物氣溶膠,將培育好的高濃度微生物溶液.一般為.108.1010，cfu.mL,利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度，步驟1確定的濃度,然后由移液管,吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的進(jìn)風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠，4.采樣,對(duì)于回。排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口 可在其后的出風(fēng)管道中采樣.離排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)門(mén)的距離根據(jù)實(shí)際工程而定、原則上出風(fēng)后有所混合、能近則好 采樣點(diǎn)沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點(diǎn),采樣周期，采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案執(zhí)行 采樣過(guò)程中.不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生,采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液。且需對(duì)剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證,以修正菌液濃度.5 培養(yǎng)、將采好的平皿立即蓋上蓋.細(xì)菌類(lèi)在、35、37，培養(yǎng),1，2,d,結(jié)核菌培養(yǎng)3周。真菌在28、培養(yǎng)3d，上述培養(yǎng)時(shí)間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整，培養(yǎng)的過(guò)程中應(yīng)定期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長(zhǎng)情況。避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不生長(zhǎng)或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過(guò)多充分生長(zhǎng)匯合等情況的發(fā)生、6.計(jì)數(shù)，可以目測(cè),電子顯微鏡 菌落計(jì)數(shù)器等對(duì)采集到且培養(yǎng)好的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，當(dāng)采到的菌落很多時(shí).在它們未生長(zhǎng)匯合前、用顯微鏡及早觀察 將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分?jǐn)?shù)菌，然后乘以所劃份數(shù),即可得出每皿總菌數(shù)。計(jì)數(shù)完畢后.可根據(jù)式 F，1。3、1。計(jì)算濃度.8,消毒滅菌.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后。需對(duì)剩余菌液以及所用各種儀器.設(shè)備、平皿等進(jìn)行消毒滅菌、酒精擦洗處理,F，1，4.在進(jìn)行潔凈室生物學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)符合以下要求.1。正式試驗(yàn)前、應(yīng)進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn) 并對(duì)各種儀器進(jìn)行調(diào)試和標(biāo)定.2 應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn).3 應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn),4。應(yīng)在陽(yáng)性試驗(yàn)中長(zhǎng)菌。陰性試驗(yàn)組不長(zhǎng)菌。5 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)做好各種儀器，設(shè)備、衣物等的消毒滅菌處理,6.試驗(yàn)結(jié)束后，需對(duì)微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證、修正式、F，1.3、3。中的菌液濃度.7.采樣周期應(yīng)設(shè)計(jì)合理 當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時(shí).宜增加采樣次數(shù)，每次采樣使用不同的采樣周期、