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附錄A,規(guī)范性附錄。滅菌效果檢測方法A.1。方法原理 本試驗(yàn)以常見的硬式鏡不銹鋼材料管腔.軟式鏡聚四氟乙烯材料管腔為模擬管腔、驗(yàn)證微生物的滅菌效果.本試驗(yàn)應(yīng)采用兩端開口的無縫測試管腔。如有接縫、則應(yīng)保證氣密性,在管腔中央放置染有細(xì)菌芽孢的載體，通過半周期滅菌循環(huán)，無菌生長。以嗜熱脂肪桿菌芽孢為指標(biāo)菌，同時進(jìn)行微生物滅菌效果評價.所有試驗(yàn)均為陰性培養(yǎng)結(jié)果，則判定結(jié)果合格、A.2。生物指示物。嗜熱脂肪桿菌芽孢,ATCC7953。A,3、驗(yàn)證器材A 3。1，載體 將芽孢液均勻涂布在直徑為0,4mm。長度為20mm、30mm不銹鋼檢測材質(zhì)上.以染菌后不堵塞管腔為限。嗜熱脂肪桿菌芽孢陽性回收菌量應(yīng)為1 106CFU、載體,5，106CFU、載體.室溫下自然干燥后再使用、A.3 2.檢測管腔 本試驗(yàn)宜采用兩端開口的無縫測試管腔、如有接縫、則應(yīng)保證氣密性、A 3、3,不銹鋼材質(zhì)無接縫管腔,10根.A 3、4,聚四氟乙烯無接縫管腔 10根.A，3,5，嗜熱脂肪桿菌芽孢的TSB培養(yǎng)基。干粉胰蛋白胨17.0g,植物蛋白胨3.0g，氯化鈉5 0g。磷酸氫二鉀2。5g、葡萄糖2，5g,共30g溶于1L蒸餾水中 制成胰蛋白胨大豆肉湯 TSB.培養(yǎng)基.A。4.操作步驟A。4,1,將染菌的載體送達(dá)不銹鋼管腔的正中央，制作10根測試樣本.將10根測試樣本均勻平行擺放在器械盒內(nèi),用雙層無紡布包裹,放置在滅菌艙內(nèi),滅菌艙內(nèi)如僅一層隔架,則10根樣本平行擺放在器械盒內(nèi)放置在滅菌艙中央.見圖A，1 若滅菌艙內(nèi)可擺放上下兩層隔架、則將10根樣本均勻擺放在兩個器械盒內(nèi).分別放置在滅菌艙內(nèi)上下兩層隔架中央 見圖A、2。按照，消毒技術(shù)規(guī)范,2002版、中的滅菌操作步驟進(jìn)行半周期滅菌,滅菌結(jié)束后以無菌操作取出細(xì)菌芽孢載體.均放到TSB培養(yǎng)基中 56，培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)結(jié)果。如無細(xì)菌生長則繼續(xù)培養(yǎng)至7d，培養(yǎng)結(jié)果仍無細(xì)菌生長則判斷為陰性 A,4.2，將染菌的體用細(xì)絲送達(dá)聚四氟乙烯管腔的正中間,制作10根測試樣本、將10根測試樣本均勻平行擺放在器械盒內(nèi)，用雙層無紡布包裹，放置在滅菌艙內(nèi)，滅菌艙內(nèi)如僅一層隔架 則10根樣本平行擺放在器械盒內(nèi)放置在滅菌艙中央,見圖A、3.若滅菌艙內(nèi)可擺放上下兩層隔架,則將10根樣本均勻擺放在兩個器械盒內(nèi)，分別放置在滅菌艙內(nèi)上下兩層隔架中央。見圖A，4、按照，消毒技術(shù)規(guī)范 2002年版 中的滅菌操作步驟進(jìn)行半周期滅菌。滅菌結(jié)束后取出細(xì)菌芽孢載體,全部放到TSB培養(yǎng)基中、56。培養(yǎng)48h.觀察培養(yǎng)結(jié)果如無細(xì)菌生長則繼續(xù)培養(yǎng)至7d.培養(yǎng)結(jié)果仍無細(xì)菌生長則判定陰性.A.5,結(jié)果計(jì)算、嗜熱脂肪桿菌芽孢重復(fù)以上兩種材質(zhì)的模擬管腔,微生物測試各重復(fù)5次。A、6,結(jié)果判定,測試結(jié)果均無細(xì)菌生長.為陰性,則判定無菌合格，