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附錄A,規(guī)范性附錄.細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)A，1,試驗(yàn)原理。將規(guī)定濃度的細(xì)菌懸液以一定比例與酸性電解水混合.作用至規(guī)定的時(shí)間后加入中和劑、終止酸性電解水的殺菌活性 進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)、然后與陽性對(duì)照組細(xì)菌懸液中的菌落數(shù)進(jìn)行比較,以確定其殺菌效果,A，2 懸液定量殺菌試驗(yàn)A。2 1 菌懸液的制備A、2 1,1、按.消毒技術(shù)規(guī)范 2002年版 要求將細(xì)菌繁殖體和枯草桿菌黑色變種芽孢制成2 109CFU mL,9.109CFU mL的試驗(yàn)用菌懸液。A,2、1,2 按,消毒技術(shù)規(guī)范，2002年版,要求將白色念珠菌制成2，108CFU,mL 9 108CFU，mL的試驗(yàn)用菌懸液，A.2,2，懸液定量殺菌試驗(yàn)操作程序A.2、2、1，開啟生成器,待產(chǎn)生的酸性電解水中有效成分處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)、用250mL磨口錐形瓶接取滿瓶后 蓋好瓶蓋。置20，1,水浴備用。A、2，2。2,取消毒試驗(yàn)用無菌大試管,先加入0、05mL試驗(yàn)用菌液、再加入0.05mL有機(jī)干擾物質(zhì)。混勻,置20.1、水浴中5min后 用無菌吸管吸取酸性電解水9、9mL注入其中，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)、A,2。2。3,待試驗(yàn)菌與消毒劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間，分別吸取0、5mL試驗(yàn)菌與酸性電解水的混合液加于含4.5mL中和劑。0。1 硫代硫酸鈉.0,1。吐溫80的生理鹽水 的試管中、混勻，作用10min后,分別吸取1。0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù) 每管樣液接種2個(gè)平皿、如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)、可進(jìn)行系列10倍稀釋后、再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)、A、2 2 4。同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)硬水代替酸性電解水,進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照、A.2、2,5、所有試驗(yàn)樣本均在37,溫箱中培養(yǎng),對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果 對(duì)細(xì)菌芽孢和白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果、A 2 2 6、試驗(yàn)重復(fù)3次。包括對(duì)照,計(jì)算各組的活菌濃度、CFU。mL。并換算為對(duì)數(shù)值。N,然后按式.A、1，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值.A 2，3，殺滅對(duì)數(shù)值的計(jì)算.計(jì)算各組的活菌濃度，CFU，mL 并換算為對(duì)數(shù)值。N。然后按式。A,1,計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值。KL。N0,Nx、A。1,式中，KL.殺滅對(duì)數(shù)值 N0 對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值 Nx，試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值.計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值時(shí) 取小數(shù)點(diǎn)后兩位值.可以進(jìn)行數(shù)字修約.但是 如果消毒試驗(yàn)組消毒處理后平均生長(zhǎng)菌落數(shù)小于1CFU,殺滅對(duì)數(shù)值即大于或等于對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值，KL,lg。N0,A,2，4.評(píng)價(jià)規(guī)定.取酸性電解水原液與3個(gè)作用時(shí)間，重復(fù)試驗(yàn)3次，在最短作用時(shí)間,以及最短作用時(shí)間的1.5倍時(shí)、對(duì)大腸桿菌.金黃色葡萄球菌。銅綠假單胞菌 枯草桿菌黑色變種芽孢，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均,5。00.對(duì)白色念珠菌、各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均，4，00 判定為消毒合格.A,2，5,注意事項(xiàng)A 2.5、1，試驗(yàn)中所使用的中和劑。稀釋液和培養(yǎng)基等。各批次均應(yīng)進(jìn)行無菌檢查、發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng),則全部試驗(yàn)需換用未污染試劑或培養(yǎng)基重做 A。2。5、2。進(jìn)行細(xì)菌液定量殺菌試驗(yàn)時(shí)、對(duì)用于清洗物品的消毒或用于沖洗浸泡消毒、有機(jī)干擾物質(zhì)采用0 3，3g，L,牛血清白蛋白。對(duì)未清洗的物品或有機(jī)物較多的物品的消毒。有機(jī)干擾物采用3.30g，L.牛血清白蛋白，